FASTest® IgG bovine – тест-набір для якісного виявлення IgG антитіл у супернатанті цільної крові, плазмі або сироватці крові великої рогатої худоби.
Ефективний імунітет базується на оптимальному рівні імуноглобулінів (IgG, особливо IgG1). Це гарантує оптимальний успіх розведення, особливо на перинатальній стадії та у новонароджених телят, і має економічне значення для тваринницької галузі.
Через особливий розвиток плаценти новонароджені телята часто не виявляють IgG.
Найважливішою складовою імунопрофілактики є адекватна підтримка імунітету IgG.
Перенесення IgG в основному базується на прийомі та резорбції молозива (адекватне пасивне перенесення) одразу після народження, максимум через 24 годин.
Неспроможність пасивної передачі може бути спричинена неадекватним вигодовуванням (зниженням життєздатності, неонатальною дихальною недостатністю), способом застосування молозива, дуже низьким рівнем IgG у молозиві, неадекватним засвоєнням IgG або стресовим впливом довкілля.
Наслідками синдрому імунодефіциту є слабкі телята з підвищеною вразливістю до інфекційних захворювань новонароджених, таких як ензоотична пневмонія телят, діарея (неонатальна діарея телят; лишай телят) та інші септикопіємічні захворювання.
Захворюваність корів (дистоція, метрит, мастит та ін.) у перинатальному періоді є такою високою, як у жодної іншої сільськогосподарської тварини. Останні дослідження показують наступні концентрації IgG1 у здорових корів з нормальними родами та фізіологічним післяродовим періодом:
– Ø 38 мг/мл на 7-му місяці вагітності
– Ø 15 мг/мл фізіологічно низька перинатальна концентрація
– Ø 30 мг/мл збільшується з 4-го місяця після пологів
Якщо інтраназальна концентрація IgG значно знижена (< 15 мг/мл), то в перинатальному періоді спостерігається підвищена частота генітальних захворювань.
Оптимальний проміжок часу для тестування з використанням FASTest® IgG bovine становить від 24 до 48 годин (максимум до 7 днів) після народження у телят і від 3 до 7 дня у корів.
FASTest® IgG bovine дозволяє ветеринару на фермі без будь-яких технічних витрат підтвердити (FASTest® IgG bovine: IgG ≤ 10 мг/мл) або виключити (FASTest® IgG bovine: IgG > 10 мг/мл) підозру на неспроможність пасивного перенесення/синдром імунодефіциту коров, а також телят.
ІНФОРМАЦІЯ ПРО МАТЕРІАЛ ЗРАЗКА
- Для дослідження потрібно 20 мкл (з піпетки яка входить до набору) теплого супернатанту цільної крові (ЦК), плазми (П) або сироватки (С) при температурі 15-25 °С, обробленого ЕДТА (див. 4.1).
- Зразки цільної крові без антикоагулянту використовувати не можна.
- Перед використанням добре перемішайте зразкок!
- Неохолоджені (15-25 °C), зразки повинні тестуватися якомога скоріше!
- При температурі 2-8 °C, зразки можна зберігати до 4 днів.
- Для тривалого зберігання зразки тримають при -20 °C.
- Зразок та всі використані компоненти тест-системи повинні бути кімнатної температури на момент застосування.
- Ендогенні та екзогенні речовини, наприклад: альбумін, фібриноген, ліпіди, С-реактивний білок, гетерофільні антитіла, особливо типу IgA, а також в’язкість, значення рН та надлишок EДTA), а також нативна кров можуть викликати інтерференції (матричні ефекти), які можуть вплинути на тестування.
ПІДГОТОВКА ЗРАЗКА
1. Підготовка цільної крові: Правильно заповніть пробірку з ЕДТА до позначки. Відразу після збору переверніть пробірку щонайменше 3 рази догори дном. Потім залиште у вертикальному положенні на 5 хвилин при 20-25 °C.
2. Отримання плазми / сировотки: Центрифугуйте суміш крові з ЕДТА (плазма) або зразок крові без ЕДТА (сировотка) (1 500 g, 10 хвилин, 20-25 °C).
3. Частково заповнені та/або недостатньо змішані пробірки з ЕДТА можуть створювати невидимі мікротромби, що призводить до затримки латерального руху та/або неспецифічних реакцій (наприклад, сіруваті тінеподібні смужки).
ПРОЦЕДУРА ТЕСТУВАННЯ
- Вийміть тест-касету з фольгованого пакета. Покладіть її на рівну поверхню.
- За допомогою одноразової пластикової піпетки відберіть зразок до мітки (=^ 20 мкл об’єму зразка). Меніск повинен бути над чорною лінією (рис. 1).
- Помістіть весь об’єм зразка (20 мкл) у вікно для зразка S тест-касети (тримайте піпетку вертикально, рис. 2). Дайте зразку повністю абсорбуватися – це може зайняти до хвилини (цільна кров)!
- Тримаючи флакон А вертикально, додайте 3 краплі буферного розчину (приблизно 120-150 мкл) без бульбашок у вікно для зразків тест-касети (рис.
ЗЧИТУВАННЯ РЕЗУЛЬТАТУ ТЕСТУ
Результат тесту необхідно зчитувати рівно через 10 хвилин після додавання буфера у вікно для зразків S.
По закінченню цього часу результати тесту не можна інтерпретувати!
- Негативний: < 10 мг/мл
- Позитивний: ≥ 10 мг/мл
НЕГАТИВНИЙ РЕЗУЛЬТАТ ТЕСТУ: IgG < 10 мг/мл (рис.4)
З’являється рожево-фіолетова ТЕСТ смужка будь-якої інтенсивності (від дуже слабкої до дуже інтенсивної) та рожево-фіолетова КОНТРОЛЬ смужка.
- Підозра на неспроможність пасивного перенесення/синдром імунодефіциту
- Рекомендується введення молозива
ПОЗИТИВНИЙ РЕЗУЛЬТАТ ТЕСТУ: IgG ≥ 10 мг/мл (рис.5)
Не видно рожево-фіолетової смужки ТЕСТ. З’являється лише рожево-фіолетова смужка КОНТРОЛЬ.
Ця лінія, незалежно від її інтенсивності, вказує на те, що тест виконано правильно.
ПРИНЦИП ТЕСТУ
FASTest® IgG bovine базується на принципі імунохроматографічного сендвіча.
Завдяки принципу конкурентного тесту, інтенсивність Т обернено пропорційна концентрації бичачого IgG у зразку!
Залежно від концентрації IgG антитіл великої рогатої худоби (АБ) у зразку (зразок АБ) спостерігається більш-менш сильне зв’язування детекторних АБ (високоспецифічних, поліклональних, мобільних, мічених золотом) із фіксованими моноклональними антитілами IgG великої рогатої худоби на тест-смужці TEST line T.
У разі відсутності/низької концентрації АБ нижче рівня відсікання зразка, жодні/небагато АБ зразка не зв’язуються з детекторними АБ. Ці вільні АБ детектора у великій кількості захоплюються АБ захоплення на Т і утворюють більш-менш слабкий або сильний інтенсивний Т.
У випадку концентрації АБ у зразку, багато АБ зразка зв’язуються з АБ детектора. Після цього вони більше не можуть зв’язуватися з Т.
Т смужка буде мати слабку або відсутню інтенсивність забарвлення.
Правильна процедура тестування буде показана другою рожево-фіолетовою КОНТРОЛЬНОЮ смужкою C.
Синдром імунодефіциту (позитивний FASTest® IgG bovine) часто призводить до вторинних захворювань, таким як, наприклад, неонатальна діарея телят. При діареї рекомендується проводити паралельні тести : FASTest® BCV Strip, FASTest® CRYPTO Strip, FASTest® E.coli-K99 Strip, FASTest® ROTA Strip, FASTest® GIARDIA Strip FASTest® D4T bovine, FASTest® CRYPTO-GIARDIA Strip FASTest® CRYPTO-ROTA D2T.
