MegaLINE® BORRELIA IgG Бореліоз — імунологічний тест для якісного виявлення специфічних антитіл IgG проти Borrelia burgdorferi sensu lato у плазмі та сироватці собаки та сироватці коня.

Бореліоз

Викликаний видами Borrelia burgdorferi sensu lato (B.b.s.l., геновиди B.b. sensu stricto, B. garinii, B. afzelii), — інфекційне захворювання собак, коней, а також інших тварин та людей. Загалом з’являється у північній півкулі. Кліщі, які перебувають борелію (Ixodes ricinus, касторовий кліщ), заражені до 30% бореліями. У собак з ендемічних районів розширеність антитіл (до 95%) кореює з часом перебування собаки на вулиці та часом укусу кліщів.

Діагностика

Діагностика часто є складною. Встановлюється лише шляхом аналітичного огляду, який поєднує багато деталей, таких як історія хвороби, клінічні симптоми (наприклад, млявість, виснаження, лихоманка, набряк лімфатичних залоз, кульгавість, артрит та неврологічні розлади) та за допомогою лабораторної діагностики. Успішна терапія пов’язана із раннім виявленням симптомів – перші ознаки з’являються через 2-5 місяців після укусу кліща.

Виявлення антитіл IgG є успішним не раніше, ніж на 4-6 тижні після експозиції кліща, через 3 місяці рівень антитіл є найвищим. Підвищення титру (сероконверсія) здебільшого спостерігається перед клінічними ознаками кульгавості та лихоманки.

Для виявлення антитіл, як відомо, золотим стандартом є двоетапна діагностика. Першим кроком є ​​скринінг-тест на антитіла IgM/IgG, наприклад швидкий тест (ІХА), ІФА та/або РНІФ. Оскільки не можна виключити хибно позитивні або хибно негативні результати тесту, нечіткий позитивний або негативний результат тесту слід перевірити за допомогою підтверджувального тесту, такого як MegaLINE® BORRELIA IgG (2-й етап діагностики). Крім того, визначення того, чи титр антитіл викликаний антитілами внаслідок вакцинації чи через природну інфекцію, можливе лише шляхом повторного аналізу за допомогою лінійного імуноблотингу (Line Blot).

На серологічну відповідь впливають різні фактори, такі як вік, імунний статус, швидкість зараження, генотипи Borrelia, перехресні реакції з іншими спірохетами, час лабораторного дослідження, лікування глюкокортикоїдами тощо. Доведено, що тест система MegaLINE® BORRELIA IgG є надійний інструмент для остаточної оцінки фактичного серологічного бореліозного статусу тварини.

• Високоспецифічність: специфічні до борелії рекомбінантні антигени (включаючи C6 та VlsE)
• Планова діагностика
• Паралельний аналіз плазми / сироватки собаки та коня
• Контролі у наборі: «Cut off» та Function+horse control
• Візуальна або програмна оцінка результатів тестування
• Собака: Чутливість 91,1%, Специфічність 91,3%
• Кінь: Чутливість 100%, Специфічність 91,3%

ЗАГАЛЬНІ ПРАВИЛА ВИКОРИСТАННЯ ТЕСТ-СИСТЕМИ

• Обережно вийміть необхідну кількість смужок з флакону після досягнення кімнатної температури.
• Безпосередньо перед використанням добре перемішайте реагенти.
• Використовуйте новий наконечник для кожного наступного дозування.
• Невикористані смужки (у закритому флаконі), та реагенти слід зберігати при 2-8°C.
• Смужки, які були використані один раз, не можуть бути використані повторно.
• Не можна використовувати пошкоджені компоненти тестового набору.
• Слід уникати прямого контакту зразків із компонентами тест-набору (перехресне забруднення).
• Слід уникати прямого сонячного випромінювання під час тестування.

ПРИГОТУВАННЯ ПРОМИВНОГО БУФЕРУ 1:20

Змішайте 1 частину  промивного буфера (конц.) з 19 частинами дистильованої води, (напр. 10 мл Промивного буфера з 190 мл води). Якщо в концентраті Промивного буфера є кристали, розчиніть їх, нагрівши буфер до 37 °C на водяній бані. Розведений буфер буде стабільним протягом 5 днів, якщо зберігати його при кімнатній температурі (20-25 °C).

ПІДГОТОВКА ЗРАЗКУ / РОЗВЕДЕННЯ ЗРАЗКУ 1:100

• Додайте 1,2 мл (1200 мкл) буфера для розведення зразків MegaBLOT® IgG BORRELIA canis (SDB) у відповідну пробірку для зразків.
• Додайте 12 мкл зразка в SDB.
• Добре гомогенізуйте буферну суміш зі зразком (SBM) (змішування піпеткою або на вортексі).

ПРОЦЕДУРА ТЕСТУВАННЯ

• Добре перемішайте матеріал зразка перед застосуванням!

ВІДБІР ЗРАЗКІВ ТА ПЕРША ІНКУБАЦІЯ

• Помістіть необхідну кількість стрипів в канали інкубаційного лотка.
• Додайте 1,2 мл розведеної собачої плазми або сироватки у відповідний канал інкубаційного лотка. Переконайтеся, що всі антигенні смужки повністю покриті. Якщо потрібно, обережно струсіть лоток або обережно проштовхніть смужки в розчин чистим наконечником піпетки. Пронумерована сторона смужки має бути спрямована догори, оскільки антигени зв’язані з цією стороною мембрани.
• Інкубуйте протягом 60 хвилин при кімнатній температурі (20–25 °C) з легким гойданням.

ПРОМИВАННЯ – УВАЖНО ДОТРИМУЙТЕСЬ ІНСТРУКЦІЙ!

• Обережно аспіруйте рідину з кожного каналу.
• Видаліть інкубаційний розчин, виливши його в ємність з гіпохлоритом.

Утилізація повинна здійснюватися згідно з відповідними правилами!

• Додайте 1 мл промивного буфера (1 мл на канал).
• Поставте інкубаційний лоток на гойдальну платформу на 5 хвилин при кімнатній температурі (20–25 °C).
• Повторіть етап промивання двічі.

ДРУГА ІНКУБАЦІЯ

• Додайте 1 мл кон’югату в кожен канал.
• Інкубуйте протягом 30 хвилин при кімнатній температурі (20–25 °C) з легким гойданням.

ПРОМИВАННЯ

Промийте, як описано в пункті «ПРОМИВАННЯ».

ТРЕТЯ ІНКУБАЦІЯ

• Додайте 1 мл субстрату (TMB) у кожен канал.
• Інкубуйте протягом 10 хвилин при кімнатній температурі (20-25 °C) під наглядом, злегка гойдуючи.
• УВАГА: не перетримайте у розчині! Деякі плазми або сироватки проявляють надмірно інтенсивний блакитний фон на смужках. Щоб уникнути цього, зупиніть реакцію раніше – промиванням деіонізованою водою.

ЗУПИНКА РЕАКЦІЇ

• Аспіруйте вміст кожного каналу та промийте кожну смужку 1 мл деіонізованою водою. Помістіть інкубаційний лоток назад на гойдальну платформу на 5 хвилин. Повторіть етап промивання.
• Вийміть смужки з інкубаційного лотка та покладіть їх номером догори на фільтрувальний папір для висихання (приблизно 30 хвилин при кімнатній температурі).
• Щоб запобігти вицвітанню, смужки слід захищати від впливу світла.