ПЛР мастер мікс, однокроковий, використовується для виконання одноетапних мультиплексних ПЛР у реальному часі з будь-якими генно-специфічними наборами праймерів, зондів. Сумісний з РНК, та з ДНК-мішенями.
Містить оптимізовані компонентами буфера для забезпечення мультиплексної ампліфікації до чотирьох цільових послідовностей РНК або ДНК в одній реакції. Мікс поставляється у 4-х кратній концентрації, що дозволяє вводити більше зразків у кожну реакцію, підвищуючи чутливість навіть у малооб’ємних реакціях. ПЛР мастер мікс містить: зворотну транскриптазу, інгібітор РНКази, термостабільну УДГ та Taq ДНК-полімеразу гарячого старту, дНТП, включаючи дУТФ та компоненти буфера.
Зберігання
ПЛР мастер мікс зберігається при: -15 – -25°C.
Протокол
1. Підготовка реакційної суміші
Підготуйте реакційну систему, згідно наведеної нижче таблиці. Розморозьте усі реагенти на льоді. Для уникнення додаткових втрат під час піпетування для кількісних реакційних лунок, слід зарезервувати 10% запасу кожного компонента. Накрийте реакційну пластину оптичною плівкою. Добре перемішайте, перевернувши, а потім центрифугуйте.
2. Умови для проведення кількісної ПЛР
3. Аналіз результатів
Аналіз даних залежить від використовуваного обладнання. Будь ласка, зверніться до посібника користувача Вашого ампліфікатора для отримання інформації. Загалом, аналіз даних включає:
- Дотримання кривої ампліфікації та встановлення її відповідно до потреб, наприклад:
а. встановити відповідні базові та порогові лінії
б. видалити деякі типові викиди з аналізу
- Спостерігайте, чи є якась різниця у значенні Ct між кількома лунками;
- Для абсолютної кількісної оцінки спостерігайте нахил, ефективність ампліфікації, значення R2, перетини, значення Ct та викиди стандартної кривої.