ПЛР мікс, мультиплексний, NGS – містить компоненти для мультиплексної ПЛР (окрім: праймерів та матриць), в одній пробірці. ПЛР мікс, NGS містить модифіковану ДНК- полімеразу NEB Q5. Цє знизило коефіцієнту помилок, а продукти ПЛР можна використовувати у NGS секвенуванні . У суміш також входить Г-Ц Енхансер для складно ампліфікованих матриць (матриці із високим Г-Ц вмістом).
*Примітка: Перед початком ПЛР приготуйте праймерну суміш з 0,5 мкМ кожного праймера.Протокол
Приготування ПЛР реакційної суміші:
- Розморозьте усі реактиви. Обережно перемішайте, перевернувши пробірку. Покладіть усі реактиви на лід.
2. Додайте до лунки наступну суміш:
[1] Кінцева концентрація кожного праймера у типовій ПЛР становить від 0,05-0,4 мкМ. У більшості випадків, кінцева концентрація 0,15 мкМ дає задовільні результати. Збільшення концентрації до 0,4 мкМ може збільшити вихід.
[2] Використовуйте Г-Ц Енхансер, коли за стандартних умов не можна ампліфікувати цілі з високим Г-Ц вмістом.
- Закрийте реакційний планшет прозорою плівкою MicroAmp.
Ампліфікуйте ДНК для аналізу
Виберіть протокол ампліфікації згідно вашого методу аналізу.
Гель-електрофорез
- Налаштуйте ампліфікацію, як зазначено у посібнику користувача. Використовуйте наступні параметри:
2. Добре перемішайте та «відкрутіть» планшет.
3. Завантажте планшет у прилад та почніть ампліфікацію. Докладні вказівки щодо завантаження та запуску дивіться у посібнику користувача Вашого приладу.
4. Проаналізуйте дані відповідно до вказівок у посібнику користувача Вашого гель-електрофорезу.
Секвенування SARS-CoV-2
- Налаштуйте програму ампліфікації, згідно до посібника користувача Вашого обладнання.
2. Добре перемішайте.
3. Завантажте реакційну суміш. Детальні інструкції щодо завантаження та роботи дивіться у посібнику користувача до Вашого обладнання.
