Taq-полімераза «Плюс» Мікс, готовий до використання, містить Taq-Плюс полимеразу, дНТФ, MgCl2 та реакційний буфер в оптимальній концентрації для ефективної ампліфікації. Для приготування кінцевої ПЛР суміші необхідно додати тільки праймери та ДНК матрицю.
Taq-полімераза «Плюс» Мікс складається з суміші Taq та Pfu полимераз, поєднує в собі процессівність Taq та високу точністю Pfu. Спеціально розроблений мікс дозволяє точніше ампліфікувати довгі матриці з високим Г-Ц вмістом. Використовується як пряма заміна звичайної Taq-полімерази.
Pfu ДНК-полімераза — знайдена у гіпертермофільному археоні Pyrococcus furiosus. Це ДНК-полімераза сімейства “В”. Має H-подібний 3′-5′ екзонуклеазний домен, типовий для полімерази сімейства B.
ДНК Taq-Плюс полімераза синтезує фрагменти ДНК з аденозиновим залишком на 3′-кінцях, що робить їх придатними для ТА-клонування.
Склад міксу:
- ДНК-полімераза Taq 0,4 од./мкл
- ДНК-полімераза Pfu 0,4 од./мкл
- 2x ПЛР буфер
- 0,4 мМ дНТФ
- 4 мМ MgSO4
- 0,02% бромфеноловий синій
Основний ПЛР протокол:
1. Приготуйте реакційну суміш у стерильній пробірці. Всі операції необхідно проводити на льоді.
Рекомендований об’єм матричної ДНК для 50 мкл реакційної суміші.
2. Змішайте, осадіть центрифугуванням. Додайте краплю мінеральної олії, якщо у ампліфікатора кришка без підігріву.
3. Проведення ПЛР (25 – 35 циклів)
4. Зразки можуть зберігатися при температурі -20 оС до використання.
5. Аналіз продуктів ампліфікації проводиться за допомогою електрофорезу у агарозному гелі та візуалізації фарбуванням бромидом етидія. Використовуйте відповідні маркери молекулярних мас.
Умови транспортування:
Дозволяється транспортувати при +18 … + 25 оС не більше 3-х діб.
Зберігання:
Всі компоненти при -20оС
Термін придатності:
1 рік
