У відповідь на пошкодження тканин та запалення організм виробляє, серед іншого, так звані білки гострої фази у печінці. С-реактивний білок є найчутливішим і найшвидшим білком гострої фази собаки, з низькою концентрацією в сироватці крові під час нормального гомеостазу та швидкою відповіддю під час та після початку запалення. Функцією СРБ є, серед іншого, стимуляція неспецифічного імунного захисту шляхом активації фагоцитів та каскаду комплементу.
Вимірювання CPБ у собак є корисним для діагностики та спостереження за запальними захворюваннями. У здорових собак спостерігається низький рівень СРБ нижче 10 мг/л. Різке підвищення рівня СРБ відбувається при запальних процесах протягом кількох годин (Ø 24–28 год у 10–100 разів) внаслідок інфекцій, імунних розладів, неоплазій та травм.
Як тільки запалення стихає завдяки успішній терапії, рівень СРБ швидко знижується протягом Ø 24–28 годин.
CPБ можна розглядати як маркер реального часу. В індикації запалень СРБ більш чутливий, ніж визначення ректальної температури або лейкоцитарна диференціальна діагностика. Ще однією перевагою визначення СРБ є його незалежність від ендогенних або ятрогенних факторів (наприклад, глюкокортикоїдів, стресу).
MegaELISA® CRP canine використовує високоспецифічні антитілах проти собачого CPБ . Його можна проводити з плазмою або сироваткою собаки у ветеринарній практиці та/або в лабораторії.
ПРИНЦИП ТЕСТУ
MegaELISA® CRP canine — непрямий кількісний імунологічний аналіз для виявлення С-реактивного білка (СРБ) за принципом “сендвіча”. На поверхні лунок зв’язані специфічні поліклональні антитіла проти СРБ. Розведені зразки плазми або сироватки, які потрібно перевірити, а також контролі вносять піпеткою в лунки та інкубують при кімнатній температурі (20–25 °C). Після етапу промивання додають кон’югат проти СРБ , мічений пероксидазою хрону, та інкубують при кімнатній температурі (20–25 °C). Незв’язаний кон’югат видаляють на наступному етапі промивання.
Після додавання субстрату у позитивних зразках зв’язаний фермент змінює безбарвний розчин у лунках на блакитний. Після додавання стоп-розчину колір змінюється з синього на жовтий.
За допомогою стандартної кривої можна кількісно визначити результати зразків.
КОМПОНЕНТИ ТЕСТ-НАБОРУ
НЕОБХІДНІ РЕАГЕНТИ / ПРИСТРОЇ, ЯКІ НЕ ВХОДЯТЬ У КОМПЛЕКТ ТЕСТ-СИСТЕМИ
- Дистильована або деіонізована вода
- Одноразові пробірки для зразків
- Одноразові пластикові піпетки
- Піпетка лабораторна (50–100 мкл, 1 мл)
- Вихровий змішувач «Вортекс»
- Фільтрувальний папір
- Мірний циліндр (1000 мл)
- Секундомір
- Станція промивання ІФА планшетів або багатоканальна піпетка (300 мкл)
- Фотометр для ІФА планшетів (450 нм, референс фільтр 620 – 650 нм)
- Волога камера / інкубатор з термостатом
- Ємність для утилізації з 0,5 % розчином гіпохлориту
СТІЙКІСТЬ ТА ЗБЕРІГАННЯ
Розведений промивний буфер стабільний протягом 4 тижнів за умови зберігання при 2–8 °C.
Уникати мікробного забруднення. Після закінчення терміну придатності гарантія якості не надається.
Відкриваючи герметичний алюмінієвий пакет з ІФА планшетом, необхідно стежити, щоб закриваюча застібка не пошкодилась!
Вийміть необхідну кількість ІФА стрипів, помістіть решту смужок у наданий пакет, закрийте пакет і зберігайте його при 2–8 °C.
Необхідно уникати прямого впливу світла на основу, щоб запобігти розкладанню / автоокисленню / зміні кольору на синій. Якщо колір субстрату змінився на синій, його більше не можна використовувати (функціональна нездатність).
ЗРАЗОК ТЕСТУВАННЯ
• Використовуйте лише зразки плазми або сироватки крові собак.
• Центрифугувати зразки цільної крові (після 4 годин зберігання зразок – непридатний для тестування.)
• Майте на увазі, що зразок матеріалу, а також усі використані компоненти тест-набору, на момент нанесення повині досягти кімнатної температури.
• Добре перемішайте матеріал зразка перед використанням.
• Неохолоджену (20–25 °C) плазму або сироватку слід перевірити протягом 24 годин. 2–8 °C плазму або сироватку можна зберігати до 5 днів. Зразки плазми або сироватки можна брати на аліквоти та постійно зберігати при мінімум –20 °C. Уникайте повторного заморожування та відтавання.
• Деякі ліпемічні зразки можуть спричиняти колір фону. У таких випадках рекомендується повторити тест із зразками кращої якості.
• Не нагрівайте.
• УВАГА: Частково заповнений та/або недостатньо змішаний ЄДТА, цитрат або гепарин можуть створювати перешкоди, що призведе до різних результатів тестування.
