Taq-полімераза «Лонг»  5 од./мкл – 50 мкл

Taq-полімераза «Лонг» складається з суміші Taq та Pfu полимераз, поєднує в собі процессівність Taq та високу точністю Pfu . Спеціально розроблений мікс дозволяє точніше ампліфікувати довгі матриці з високим Г-Ц вмістом. Використовується як пряма заміна звичайній Taq-полімеразі. Синтезує фрагменти ДНК з аденозиновим залишком на 3′-кінцях, що робить їх придатними для ТА-клонування.

Застосування у:

• ПЛР-ампліфікація фрагментів ДНК довжиною (до 20кб);
• ДНК-мічення;
• Секвенуванні;
• Клонуванні

Активність:

За одну одиницю активноcті приймається кількість ферменту, необхідна для включення 10 нмоль дНТФ у кислотно-нерозчинну фракцію за 30 хвилин при +74°С.

Примітка:

• 10 х ПЛР буфер I – підходить для більш довгих матриць.
• 10 х ПЛР буфер I I – більш точний, але не оптимальний для довгих матриць.

Користувач вибирає оптимальний буфер для конкретного завдання.

Основний ПЛР протокол:

Протокол служить загальним керівництвом.

Час, температура, концентрація ДНК Taq -полімерази, праймери, Mg²⁺ та кількість матричної ДНК можуть відрізнятися від основного ПЛР протоколу.

1. Приготуйте реакційну суміш у стерильній пробірці. Усі операції необхідно проводити на льоді.

Кількісні рекомендації щодо ДНК-матриць на 50 мкл реакційної суміші:

2. Перемішайте, осадіть центрифугуванням. Додайте краплю мінерального олії, якщо у ампліфікатора кришка без підігріву.

3. Проведення ПЛР

4. Зразки можуть зберігатися при температурі -20°С до використання.

• Денатурація може тривати від 1-5 хвилин при 95 °С залежно від Г-Ц змісту матриці.
• Оптимальна температура відпалу на 5 ^оС нижче температури плавління дуплексу ДНК з праймером. Якщо отримані неспецифічні продукти ПЛР, оптимізація температури відпалу може бути виконана шляхом поступового підвищення температури на 1-2°С.
• Кількість циклів залежить від кількості матричної ДНК у реакційній суміші та від очікуваного виходу продукту ПЛР. Для більшості реакцій зазвичай досить 25-35 циклів. При недостатній кількості вихідної матриці може знадобитися 40 циклів.
• Час елонгації може бути збільшено для ампліконів, які будуть клоновані у T/A вектори.

Буфер для зберігання:

• 20 мМ Трис-НСl (рН 8,0)
• 100 мМ KCl
• 3 мМ MgCl₂
• 1 мМ DTT
• 0,1% Тритон Х-100
• 0,1% Твін 20,
• 0,2 мг/мл БСА
• 50% водный розчин гліцерину

 

10 х ПЛР буфер I (з Mg²⁺):

• 500 мМ Трис-НСl (рН 8,8)
• 160 мМ (NH₄)₂SO₄
• 25 мМ MgCl₂
• 1% Тритон Х-100

10 х ПЛР буфер I I (з Mg²⁺):

• 200 мМ Трис-НСl (рН 8,8)
• 100 мМ KCl
• 100 мМ (NH₄)₂SO₄
• 16 мМ MgSO₄
• 1% Тритон Х-100
   Умови транспортування:

Дозволяється транспортувати при + 25 ^оС не більше 3-х діб

Зберігання:

Всі компоненти при  -20 ^оС

Термін придатності:

1 рік