Taq-полімераза «Плюс» 2,5 од./мкл – 100 мкл
Taq-полімераза «Плюс» складається з суміші Taq та Pfu полимераз, поєднує процесивність Taq та високу точністю Pfu. Мікс дозволяє точніше ампліфікувати довгі матриці з високим Г-Ц складом. Використовується для ампліфікації ДНК мішені до 20 тис. п.о., як пряма заміна звичайній Taq-полімеразі.
ДНК Taq-Плюс полімераза синтезує фрагменти ДНК з аденозиновим залишком на 3′-кінцях. Частота помилок ПЛР-ампліфікації становить: 1,0 × 10-5 на нуклеотид за цикл.
Активність:
За одну одиницю активноcті приймається кількість ферменту, необхідна для включення 10 нмоль дНТФ у кислотно-нерозчинну фракцію за 30 хвилин при +74°С.
Буфер зберігання:
- 20 мМ Трис-НСl (рН 8,0)
- 100 мМ KCl
- 3 мМ MgCl2
- 1 мМ DTT
- 0,1% Тритон Х-100
- 0,1% Твін 20,
- 0,2 мг/мл БСА
- 50% водний розчин гліцерину
10х ПЛР буфер з Mg2+:
- 100 мМ Трис-НСl (рН 8,0)
- 500 мМ KCl
- 16 мМ MgSO4
- 1% Тритон Х-100
Застосування:
- Ампліфікація до 20 тис. п.о.;
- Високоточна ПЛР
Основний ПЛР протокол:
Протокол служить загальним керівництвом. Час, температура, концентрація ДНК Taq -полімерази, праймери, Mg2+ та кількість матричної ДНК можуть відрізнятися від основного ПЛР протоколу.
1. Приготуйте реакційну суміш у стерильній пробірці. Усі операції необхідно проводити на
льоді.
2. Змішайте, осадіть центрифугуванням. Додайте краплю мінеральної олії, якщо у ампліфікатора кришка без підігріву.
3. Проведення ПЛР (25 – 35 циклів)
4. Зразки можуть зберігатися при температурі -20 оС до використання.
5. Аналіз продуктів ампліфікації проводиться за допомогою електрофорезу у агарозному гелі та візуалізації фарбуванням бромидом етидія. Використовуйте відповідні маркери молекулярних мас.
Умови транспортування:
Дозволяється транспортувати при +18 … + 25 оС не більше 3-х діб.
Зберігання:
Усі компоненти при -20оС
Термін придатності:
1 рік
