MegaELISA® CRYPTO – імуноферментний аналіз для якісного виявлення Cryptosporidium parvum у фекаліях тварин.

Криптоспоридії є широко поширеними зоонозними збудниками, паразитуючий у тонкому кишечнику домашніх та сільськогосподарських тварин, а також людей. Криптоспоридії утворюють два типи інфекційних ооцист: 20% тонкостінних, які залишаються в хазяїні, де вони викликають повторне зараження через аутоінфекцію. Решта 80% мають товстостінну структуру та виводяться з організму періодично (не під час кожної дефекації). Вони дуже стійкі та можуть залишатися заразними місяцями. Заражають тварин, а також людей через питну воду. Хронічними носіями можуть бути безсимптомні тварини.

Переважно хворіють новонароджені та молоді тварини. Cryptosporidium parvum викликає діарею різного ступеня тяжкості. Може призвести до: імуносупресії, відсутність апетиту, пірексії, зневоднення. Бувають летальні випадки. У телят разом із ротавірусами, коронавірусами та E.coli (F5), C. parvum викликає одне з найбільш частих та небезпечних захворювань, яке називається – неонатальною діареєю.

Численні дослідження показують переваги імуноферментного аналізу для якісного виявлення Cryptosporidium parvum у порівнянні зі звичайними методами виявлення, як-от мікроскопічний аналіз (наявності ооцист у фекальному мазку або після збагачення за допомогою флотації) або за допомогою “MIFC” метода (Мертіолат-йод-формальдегідна концентрація), або навіть через біопсію кишечника.

MegaELISA® CRYPTO ідеально підходить як стандартний тест для ветеринарних лабораторій, для швидкого та стандартизованого рутинного тесту інтактних C. parvum та ооцист C.parvum, а також усіх вегетативних стадій C. parvum та їх продуктів розпаду, завдяки своїй високій чутливості та специфічності.

MegaELISA® CRYPTO — імуноферментна тест система для якісного виявлення антигенів Cryptosporidium parvum у фекаліях кишенькових, домашніх та сільськогосподарських тварин.

ПРИНЦИП ТЕСТУ

MegaELISA® CRYPTO — це якісний імунологічний аналіз де специфічні антитіла проти специфічних антигенів Cryptosporidium зв’язуються з поверхнею лунки ІФА планшета, принцип «сендвіч» .

Суспензію зразка фекалій, який потрібно перевірити, а також внутрішні контролі інкубують на першому етапі при кімнатній температурі (20–25 °C) з біотинільованими антитілами до Cryptosporidium (Кон’югат 1) в лунках ІФА планшета.Під час присутності антигенів Cryptosporidium утворюється “сендвіч-комплекс”, що складається з іммобілізованих антитіл, антигену Cryptosporidium та біотинільованого антитіла.

Після етапу промивання додають кон’югат поліпероксидази стрептавідину (Кон’югат 2) та знову інкубують при кімнатній температурі (20–25 °C).Незв’язаний поліпероксидазний кон’югат стрептавідину видаляють на наступному етапі промивання. Після додавання субстрату зв’язаний фермент перетворює безбарвний розчин в лунках планшета з позитивними зразками на блакитний розчин. При додаванні стоп-розчину колір змінюється з синього на жовтий. Згасання пропорційне концентрації антигенів Cryptosporidium, у зразку.

КОМПОНЕНТИ ТЕСТ-НАБОРУ

НЕОБХІДНІ РЕАГЕНТИ / ПРИСТРОЇ, ЯКІ НЕ ВХОДЯТЬ У КОМПЛЕКТ ТЕСТ-СИСТЕМИ

• Дистильована або деіонізована вода
• Одноразові пробірки для зразків
• Одноразові пластикові піпетки
• Піпетка лабораторна (50–100 мкл, 1 мл)
• Вихровий змішувач «Вортекс»
• Фільтрувальний папір
• Мірний циліндр (1000 мл)
• Секундомір
• Станція промивання ІФА планшетів або багатоканальна піпетка (300 мкл)
• Фотометр для ІФА планшетів (450 нм, референс фільтр 620 – 650 нм)
• Волога камера / інкубатор з термостатом
• Ємність для утилізації з 0,5 % розчином гіпохлориту

СТІЙКІСТЬ ТА ЗБЕРІГАННЯ

Розведений промивний буфер стабільний протягом 4 тижнів за умови зберігання при 2–8 °C.

Уникати мікробного забруднення. Після закінчення терміну придатності гарантія якості не надається.

Відкриваючи герметичний алюмінієвий пакет з ІФА планшетом, необхідно стежити, щоб закриваюча застібка не пошкодилась!

Вийміть необхідну кількість ІФА стрипів, помістіть решту смужок у наданий пакет, закрийте пакет і зберігайте його при 2–8 °C.

Необхідно уникати прямого впливу світла на основу, щоб запобігти розкладанню / автоокисленню / зміні кольору на синій. Якщо колір субстрату змінився на синій, його більше не можна використовувати (функціональна нездатність).

ЗРАЗОК ТЕСТУВАННЯ

Можна використовувати зразки фекалій кишенькових домашніх тварин, домашніх та сільськогосподарських тварин.

Слід подбати про те, щоб зразки фекалій були зібрані в відповідні транспортні пробірки!

Слід уникати контакту зразка калу з транспортними середовищами, консервантами, сироватками тварин, іонами металів, окислювачами або детергентами, оскільки це може призвести до інтерференції з MegaELISA® CRYPTO.

Якщо слід використовувати ректальні мазки, подбайте про наявність достатньої кількості зразкадля проведення тесту (мінімум 100 мг).

Через неоднорідне  розтащування антигенів у фекаліях, матеріал зразка необхідно перемішати до однорідності (шпателем, вортекс-міксером) перед відбором.

Для тесту потрібна необхідна кількість калу, як описано в пункті “Підготовка зразка”! Кількість залежить від консистенції зразка.

Неохолоджену (20–25 °C) пробу досліджувати протягом 4 годин! При 2–8 °C зразок можна зберігати до 3 днів, постійно при мінімумі –20 °C. Слід уникати багаторазового розморожування та заморожування. Розморожені зразки необхідно змішати до однорідності перед розведенням (оптимально за допомогою вихрового змішувача).

Під час обстеження більших груп тварин для виявлення безсимптомних носіїв слід також досліджувати (одних і тих самих конюшнях/домогосподарствах) зразки фекалій клінічно інаппарантних тварин/контактних тварин.