Набір для виділення геномної ДНК з цільної крові

Ціни відображаються зареєстрованим користувачам

* 96% етанол в комплект набору не входить

(100 екстракцій)

SKU: Д 122 (100 екстракцій) Category:

Набір для виділення геномної ДНК з цільної крові являє собою систему швидкої, високоякісної екстракції на спін колонках. Система використовує технологію зв’язування ДНК з сорбентом спін-колонок на основі діоксиду кремнію без використання фенолу/ хлороформу. Буферна система оптимізована для забезпечення селективного зв’язування ДНК з силікатною мембраною. Простий протокол центрифугування повністю видаляє білки, двовалентні катіони та вторинні метаболіти. Чиста ДНК елюююється водою або слабо-сольовим буфером.
Набір для виділення геномної ДНК з цільної крові підходить для: антікоагулірованної крові (свіжої крові, крові з ЕДТА, гепарином, цитратом). Вихід геномної ДНК становить 3-10 мкг з 400 мкл цільної крові. Геномна ДНК підходить для: ПЛР, рестрикції, секвенування та т.п.

Характеристика:

Очищена ДНК, має співвідношення А260/А280=1,7 та 1,9

 Термін придатності та особливості зберігання:
  • Зберігайте Протеїназу К при температурі -20℃!
  • Інші реактиви та колонки зберігати при кімнатній температурі (+15 … 25°С).
  • У разі утворення осаду у Розчині DS та Розчині MS, перед використанням,їх  необхідно інкубувати при + 37 °C .
  • Перед першим використанням набору додайте етанолом 96% (90 мл) до промивного буфера (РЕ).
  • Перевірте наявність осаду у розчині перед кожним використанням.
    • Всі роботи проводяться при кімнатній температурі
    • Після використання пакет із спін-колонками необхідно герметично закрити.
    • Термін придатності: 12 місяців з дати виготовлення.
    • При транспортуванні особливі умови не вимагаються.
Додаткове обладнання та реагенти:
      • Мікроцентрифуга для пробірок типу Еппендорф (об’ємом 1,5-2 мл) з максимальною швидкістю центрифугування не менше 13000 об/хв (11000g).
      • Дозатори змінного об’єму та наконечники з фільтрами до них.
      • Стерильні пробірки типу Еппендорф об’ємом 1,5 мл, вільні від нуклеаз.
Протокол:

1. Помістіть 400 мкл антикоагулірованной крові в мікроцентріфужную пробірку на 1,5 мл, додайте 2-а об’єма Розчину RS. Перемішайте на вортексі. Центрифугуйте при 5000 об/хв протягом 3 хвилин. Видаліть надосадову рідину. Колір осаду повинен бути: білий або рожевий

* ПРИМІТКА:

Якщо колір осаду темно-червоний, це свідчить про те, що процес лізису не закінчено, необхідно додати ще 500 мкл Розчину RS до зразка, для завершення лізису.

  • Кров ссавців містить без’ядерні еритроцити. Кров тварин, таких як птахи, риби або жаби, містить ядерні еритроцити.
  • Для 400 мкл крові з без’ядерними еритроцитами вихід геномної ДНК 3-10 мкг.
  • Для крові з ядровмісними еритроцитами об’єм крові на пробірку не повинен бути більше ніж 20 мкл.
    Вихід геномної ДНК з 20 мкл цільної крові становить 40 мкг.

2. Додайте 200 мкл Розчину DS. Перемішайте на вортексі 3-5 сек. або пропіпетуйте протягом 5-10 сек.

Для отримання геномної ДНК без РНК, додайте 4 мкл РНКази А (100 мг/мл) та інкубуйте протягом 5 хвилин при кімнатній температурі. РНКаза А (100 мг/мл) не входить до комплекту.

3. Додайте 20 мкл Протеїнази К та 220 мкл Розчину MS. Ретельно перемішайте на вортексі. Інкубуйте при + 65°С протягом 10 хвилин, для отримання гомогенного розчину.

4. Додайте 220 мкл етанолу (96%) до лізату та ретельно перемішайте на вортексі.

5. Відберіть суміш з Кроку №4, в спін-колонку, вміщену в пробірку для збору 2 мл (додається). Центрифугуйте при 12000 об/хв протягом 1 хв. Видаліть вміст пробірки для збору.

На цій стадії геномна ДНК абсорбується на мембрані спін-колонки.

6. Додайте 500 мкл Промивного буфера PS та центрифугуйте протягом 1 хв при 12000 об/ хв. Видаліть вміст пробірки для збору.

Буфер РS повинен бути попередньо розведений ізопропанолом.

7. Додайте 500 мкл Промивного буфера PE та центрифугуйте протягом 1 хв при 12000 об/хв. Видаліть вміст пробірки для збору.

Буфер РЕ повинен бути попередньо розведений етанолом (96-100%).

8. Повторіть крок №7.

9. Центрифугуйте протягом 3 хв при 12000 об/хв для осушення мембрани колонки.

Важливо повністю видалити весь спирт. Видаліть пробірку для збору.

10. Помістить спін-колонку у чисту 1,5 мл центрифужную пробірку (не входить у комплект). Нанесіть 30-100 мкл елююючиго буфера TE (попередньо нагрітого до 65°С) на мембрану. Інкубуйте при кімнатній температурі 2 хвилини.

Елююючий буфер TE може бути замінений деіонізованою водою. Але рН повинен бути 8,0-8,5. Нагрійте елююючий буфер ТЕ до 65°С , це збільшить вихід геномної ДНК.

11. Центрифугуйте при 12000 об/хв протягом 2 хвилин. Пробірка містить очищену ДНК.

 

 

Related products