Набір для екстракції вірусної ДНК/РНК з тампона /слини (Спін-колонки). Виділення вірусної нуклеїнової кислоти високої чистоти з: плазми, сироватки, мазка з носоглотки, мокротиння, рідини з бронхів/альвеолярного лаважу, асциту, супернатанту культур клітин та сечі.
Метод ізоляції: зв’язування ДНК/РНК з мембраною спін колонки. Зразок гомогенізують у буфері для лізису, а нуклеїнову кислоту вивільняють у буфер. Буфер для лізису містить гуанідин. Мембрана спін колонки зв’язує нуклеїнову кислоту, шляхом водневого зв’язку та електростатичної фізико-хімічної дії, тоді як білки та інші домішки ні. Лізат переносять до адсорбційної колонки, а мембрану фільтра нуклеїнової кислоти промивають для видалення залишкових білків та інших домішок. Елююють буферним розчином з низьким вмістом солі. Отримані нуклеїнові кислоти можуть бути використані у: зворотній транскрипції, ПЛР, кількісній ПЛР, NGS та Нозерн гібридизації.
Компоненти набору:
| Реагент | Кількість | Опис |
| Лізис буфер | 50 мл | Середовище для лізису та зв’язування з мембраною |
| Промивний буфер | 24 мл | Видаляє білки та інші домішки |
| Елюційний буфер | 6 мл | |
| Спін колонки | (50 шт) х 2 | Адсорбують вірусну нуклеїнову кислоту та збирають фільтрат |
Умови зберігання:
Зберігати при кімнатній температурі (15-25°C).
Транспортувати при кімнатній температурі.
Примітки:
- Приготуйте наконечники для піпеток, центрифужні пробірки 1,5 мл без РНКази, центрифугу тощо.
- Вірус має сильну здатність до зараження, перед операцією необхідно зробити різноманітні заходи захисту.
- Уникайте повторного заморожування-розморожування зразків, екстрагована вірусна РНК буде деградувати.
- Усі робочі процедури, якщо не зазначено, проводять при кімнатній температурі (15-25°C).
- Використовуючи цей набір, надягайте лабораторний халат, одноразові латексні рукавички, одноразові маски та використовуйте витратні матеріали без РНКази, щоб максимально уникнути забруднення/контамінації.
- Будь ласка, перевірте, чи є кристалічний осад у буфері для лізису. Якщо випадає кристалічний осад, нагрійте до 37°C, поки осад не розчиниться. Перед використанням добре перемішайте.
Перед використанням:
Додайте 96 мл безводного етанолу до промивного буфера та зберігайте при кімнатній температурі.
Протокол
- Додайте 500 мкл лізис буфера у центрифужну пробірку без РНКази 1,5 мл (надається окремо).
- Додайте 200 мкл зразка, ретельно перемішайте на вортексі (якщо зразок менше 200 мкл, доведіть об’єм фізіологічним розчином до 200 мкл).
- Перенесіть суміш у спін-колонку (з пробіркою для збору). Центрифугують при 12000×g протягом 1 хв.
- Видалить фільтрат та помістіть спін-колонку назад у 2 мл пробірку для збору. Додайте 600 мкл промивного буфера та центрифугуйте при 12 000×g протягом 30 секунд, видаліть фільтрат.
Примітка: переконайтеся, що до промивного буфера додано правильну кількість безводного етанолу.
- Повторіть Крок № 4 ще раз.
- Центрифугуйте протягом 2 хв при 12 000×g для висихання мембрани колонки. Викиньте фільтрат та пробірку для збору.
- Перенесіть спін-колонку у нову пробірку для збору 1,5 мл (надається в комплекті), додайте 50 мкл елюційного буфера до центру мембрани спін-колонки та залиште її при кімнатній температурі на 1 хв. Центрифугуйте при 12000×g протягом 1 хв.
- Викиньте спін-колонку. Отриману ДНК/РНК можна використовувати у подальших виявлення
Зберігання:
Усі реагенти зберігати при кімнатній температурі.
Процес:
