Протеїназа К – ендолітична протеаза, розщеплює пептидні зв’язки на карбоксильних аліфатичних, ароматичних або гідрофобних сторонах амінокислот. Протеїназа К – серинова протеаза. Найменший пептид, який гідролізується цим ферментом – тетрапептид.
Області застосування
– Виділення геномної ДНК з культивованих клітин та тканин;
– Видалення ДНК-аз та РНК-аз при екстракції ДНК/РНК з тканин або ліній клітин;
– Визначення локалізації ферментів;
– Підвищення ефективності клонування ПЛР-продуктів
Походження
З клітин дріжджів з клонованим геном, що кодує ендолітичну протеазу Engyodontium album (Tritirachium album).
Молекулярна маса
29,3 кДа мономер
Рекомендації щодо приготування розчину
Основний розчин можна приготувати у концентрації 40-80 мг/мл у буфері для розведення [20 мМ трис-HCl (pH 7,4), 1 мМ CaCl2] або [20 мМ трис-HCl (pH 7,4), 1 мМ CaCl2, 2% гліцерин], стерилізувати за допомогою фільтра 0,22 мкм та розводити у кінцевій концентрації 20-40 мг/мл у 50% гліцерині.
Зберігати в аліквотах при 24ºC до -80ºC. Для стерильної фільтрації рекомендується використовувати мембрани ПФС (PES) та ПВДФ PVDF з низьким зв’язуванням білків.
Інгібування та інактивація
Інгібітори: Протеїназа К не інактивується хелаторами металів, тіолреактивними реагентами або специфічними інгібіторами трипсину та хімотрипсину. Фенілметилсульфонілфторид та диізопропілфосфорофторидат повністю інгібують фермент.
Інактивується при нагріванні при 95°C протягом 10 хвилин.
Примітка
– Оптимальна активність при 50-55°C;
– Швидка денатурація ферменту відбувається при температурі вище 65°C;
– Рекомендована робоча концентрація протеїнази К становить 0,05-1 мг/мл. Активність ферменту стимулюється 0,2-1% ДСН (SDS) або 1-4 М сечовиною;
– Са2+ захищає протеїназу К від автолізу, підвищує термостабільність та виконує регуляторну функцію для сайту зв’язування субстрату протеїнази К;
– Стабільна в широкому діапазоні рН: 4,0-12,5, оптимальний рН 7,5-8,0
Умови зберігання
Рекомендується -20ºC.
Термін придатності три роки при зберіганні в закритому контейнері при температурі нижче 4ºC.
Протеїназа К (ліофілізат) транспортується при кімнатній температурі.
