Протеїназа К — високоефективна серинова ендолітична протеаза, яка широко використовується у молекулярній біології, генетичних дослідженнях, молекулярній діагностиці та біотехнології. Фермент здатний гідролізувати пептидні зв’язки аліфатичних, ароматичних та гідрофобних амінокислот, забезпечуючи ефективне руйнування білків під час екстракції нуклеїнових кислот. Найменшим субстратом, який піддається гідролізу, є тетрапептид.

Протеїназа К для виділення ДНК та РНК застосовується для очищення генетичного матеріалу від білкових домішок, інактивації нуклеаз та підвищення чистоти препаратів нуклеїнових кислот. Фермент ефективно руйнує ДНКази та РНКази, що дозволяє отримувати високоякісну ДНК та РНК для подальшого використання у полімеразній ланцюговій реакції, секвенуванні, клонуванні та інших молекулярно-біологічних дослідженнях.

Продукт використовується для виділення геномної ДНК із тканин, культивованих клітин, біологічних рідин та інших зразків. Також фермент застосовується для підвищення ефективності клонування продуктів ПЛР та визначення локалізації ферментів у біологічних системах.

Протеїназа К 20 мг/мл характеризується високою стабільністю у широкому діапазоні рН та зберігає активність у присутності денатуруючих агентів. Активність ферменту стимулюється додаванням ДСН та сечовини, що робить його ефективним для роботи зі складними біологічними зразками. Іони кальцію захищають фермент від автолізу та підвищують його термостабільність.

Фермент демонструє оптимальну активність при температурі 50–55°С та оптимальному рН 7,5–8,0. При температурі вище 65°С відбувається поступова денатурація білка, а повна інактивація досягається нагріванням до 95°С протягом 10 хвилин.

Основні переваги

• ефективне руйнування білків;
• видалення ДНКаз та РНКаз;
• висока чистота виділеної ДНК та РНК;
• стабільність у широкому діапазоні рН;
• висока активність у присутності денатуруючих агентів;
• підходить для молекулярної діагностики;
• сумісність із методами ПЛР та секвенування;
• висока термостабільність.

Застосування

Протеїназа К використовується для:

• виділення геномної ДНК;
• екстракції РНК;
• інактивації ДНКаз та РНКаз;
• очищення нуклеїнових кислот;
• підготовки зразків для ПЛР;
• секвенування;
• клонування продуктів ПЛР;
• молекулярно-біологічних досліджень;
• ветеринарної та медичної діагностики.

Буфер для зберігання

• 50 мМ Трис-HCl (рН 7,5)
• 5 мМ CaCl₂
• 50% гліцерину

Інгібування та інактивація

Фермент не інактивується хелаторами металів, тіолреактивними сполуками або специфічними інгібіторами трипсину та хімотрипсину.

Повне інгібування викликають:

• фенілметилсульфонілфторид;
• диізопропілофосфат.

Інактивація ферменту відбувається при нагріванні до 95°С протягом 10 хвилин.

Умови зберігання

Зберігати при температурі -20°С.

Термін придатності

12 місяців за умови дотримання правил зберігання.